В клиническом испытании принимали участие студенты 5 курса стоматологическогофакультета ГУ НГМА, клинические ординаторы кафедр терапевтическойстоматологии, а также пациенты-добровольцы. Всего 18 человек, ввозрасте 21 года, практически здоровые. Эпидемиологическое обследование сводилось к определению интенсивности кариеса зубов индексу КПУ, константы "К","П", "У", гигиенического индекса (ГИ) по Green-Vermillion. Состояниепародонта определяли методом проведения проб Шиллера-Писарева ипапиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (ПМА Состояние местного иммунитетаполости рта определяли с помощью изучения показателя естественной колонизации буккального эпителия слизистой оболочки полости рта и коэффициента сбалансированности факторов местного иммунитета.
Все добровольцы были разделены на 2 группы:
1-я или группа ЭЛИКСИР - Гигиена полости ртапациентами осуществлялась с использованием новогоополаскивателя, как в домашних условиях, так и в условиях кабинета гигиены стоматологической поликлиники НГМА.
2-я или контрольная группастудентов осуществляла гигиену полости рта обычным традиционным способом.
Все испытуемые в домашних условиях, в течение 1 месяца чистили зубы 2 раза в день, утром после завтрака и вечером перед сном, по 3,5-4 минуты зубной пастой "Жемчуг", для полоскания использовался новый ополаскиватель для полости рта по 20-25мл. Всем пациентам, участвующим в эксперименте определяли индекс КПУ,гигиенический индекс (ГИ) по Green-Vermillion проводили пробу Шиллера-Писарева и определяли папиллярно-маргинальный альвеолярный индекс (ПМА) до и после применения ополаскивателя для полости рта. Определяли индекс колонизации буккального эпителия (ИКБЭ коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета полости рта(Кеб.).
Индекс колонизации буккального эпителия (ИКБЭ) микроорганизмами определяли у 100пациентов, в возрасте 21 года". Буккальные эпителиоциты получали от доноров до и после применения ополаскивателя для полости рта. О естественной колонизации судили по числу адгезированных бактериальных клеток на одном эпителиоците. Для исследования использовали эпителиоциты практически здоровых людей, с разной интенсивностью кариозного процесса и гигиеническим состояниемполости рта, осуществлявших гигиену с использованиемополаскивателя для полости рта или безополаскивателя ,традиционным способом.Эпителиоциты брали стерильной ложкой с внутренней поверхности щеки, помещали в забуференный физиологический раствор, трижды отмывали от несвязанных бактерий центрифугированием и готовили взвесь. Для изучения естественной колонизации делали мазок из буккального эпителия, фиксировали, окрашивали по Романовскому-Гимзе и просматривали под микроскопом 100 эпителиоцитов. Каждый эпителиоцит в отдельности был объектом исследования. Учитывалось среднее количество адгезированных бактериальных клеток(БК)наодном эпителиоците. Количество БК выражали в баллах, согласно разработанной шкале (до 9 бактериальных клеток - 0 баллов, 10-59 клеток - 1-2 балла, 60-89 бактериальных клеток - 3 балла, 90-119 клеток - 4 балла, 120-159 -5 баллов и 160 и более бактериальных клеток на 1 эпителиоците - 6-10 баллов).
Определение коэффициента сбалансированности факторов местного иммунитета полости рта (Ксб.).
Для оценки состояния местного иммунитета полости ртаопределяли уровень секреторного иммуноглобулина А (sIgА), сывороточного IgА и IgG, а также коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета (Ксб).
Интегрированный показатель (Ксб) включает множество характеристик местного иммунитета полости рта , в частности, содержание сывороточных иммуноглобулинов слюны А, G и лизоцима. Иммуноглобулины и активность лизоцима определяли в смешанной слюне, которая забиралась в одно и то же время суток - в утренние часы, натощак, без стимуляции слюнных желез методом сплевывания в стерильную пробирку в количестве 5-7 мл. Пробирка с ротовой жидкостью плотно закрывалась стерильным ватным тампоном подписывалась порядковым номером согласно списку, хранилась вертикально в замороженном виде. Всего проведено 64 анализа (Ксб.).
Определение секреторного иммуноглобулина А (sIgA).
Количественное определение sIgA в ротовой жидкости проводили методом радиальной иммунодиффузии (РИД) - О.Mancini, А. Carbonara (1965) в модификации Е.В.Чернохвостовой, С.И.Гольдерман (1975). В работе применяли антисыворотку к секреторному компоненту (sc) и соответствующий стандарт производства Московского НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова. Секреторный иммуноглобулин А определяли в надосадочной жидкости, концентрацию его выражали в г/л. Всего было проведено 64 анализов:
Определение сывороточных иммуноглобулинов А и С (IgA,IgG).
Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов А (IgA) и G(IgG) в слюне проводили методом радиальной иммунодиффузии (РИД) -(Mancini, А.О.Carbonaro (1965), в модификации Е.В.Чернохвостовой, С. И. Гольдерман (1975). В работе применяли моноспецифические антисыворотки стандарт Горьковского НИИЭМ производства. IgА и IgG определяли надосадочной жидкости, концентрацию выражали в г/л. Всего было проведено по 64 анализа.
Определение активности лизоцима (Liz.).
Активность лизоцима определяли в смешанной слюне (%), которая забиралась в одно и тоже время суток - в утренние часы, натощак, без стимуляции слюнных желез, методом сплевывания в стерильную пробирку. Активность лизоцима смешанной слюны определяли фотонефелометррическим методом В.Г. Дорофейчук (1968). В основе нефелометрического метода определения лизоцимной активности лежит свойство лизоцима лизировать мукополисахариды клеточных стенок эталонного штамма Micrococolysodeikticus. Из тест-культуры m. Lysodeikticus готовили взвесь в фосфатном буфере рН = 7,2 - 7,4. Далее фильтровали и стандартизировали по ФЭК - 56 при использовании зеленого светофильтра (длина рабочей волны 540 нм) в кювете с рабочей длиной 3 мм. При нефелометрии светопропускание исходной взвеси доводили до 20% (4 млрд. бактерий). К 1,47 мл приготовленной микробной взвеси добавляли 0,03 мл исследуемого субстрата. Пробирки выдерживали при t +37° С в течение 60 минут и проводили нефелометрию при тех же условиях, которые соблюдали при стандартизации исходной взвеси. Для определения процента активности лизоцима из процента светопропускания испытуемой взвеси вычитали процент светопропускания исходной микробной взвеси (20%). Исследуемая слюна разводилась фосфатным буфером в соотношении1:20. Было проведено 64 исследования концентрации лизоцима в ротовой жидкости пациентов с разным уровнем здоровья ротовой полости.
Определение коэффициента сбалансированности факторов местного/ иммунитета полости рта (Кеб).
Всего было проведено 64 анализа IgA, 64 анализа IgA, 64 анализа IgG и 64 анализа Liz. Далее был определен коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета полости рта у 64 пациентов. Коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета (Ксб), как интегрированный показатель состояния местного иммунитета полости рта (Н.И.Толмачева, 1987), позволяет математически отразить это состояние. При наличии множества характеристик местного иммунитета, которые находятся во взаимодействии, необходимо математическое выражение сбалансированности изучаемых параметров. Таким интегрированным показателем является коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета. Формула для определения Ксб. составлена с учетом функциональных связей лизоцима симмуноглобулинами:
IgА и IgG - концентрация иммуноглобулинов в (г/л)
Liz- активность лизоцима смешанной слюны в (%)
40% -условная норма активности лизоцима
0,6 - соотношение IgА/IgG которое имело место у подавляющего большинства здоровых детей.
По нашим данным при Ксб. 0,1-1,0 - пациенты составляют группу здоровых, 1,1-2,0 - группу риска, 2,1 и более - группу больных, когда отмечается неблагоприятное состояние местного иммунитета полости рта .
Статистическая обработка результатов исследования.
Обработка результатов исследования проводили с использованием методом математической статистики. Достоверность различий средних величин оценивали с помощью критериев Стьюдента.
